Tritryp paraziták

Parazitológiai Absztrakt Az emberek ellenállnak a Trypanosoma brucei afrikai parazita fertőzésének a szérum apolipoprotein L1 APOL1 tripanolitikus aktivitása miatt.

Az endocitózis által a parazita felvételét követően az APOL1 pórusokat képez az endolizoszomális membránokban és kiváltja a lizoszóma duzzanatot. Bevezetés A protozoánus flagellát Trypanosoma brucei brucei az afrikai trippanoszómák prototípusa, az emlős gazdaszervezet számos fertőzésére képes paraziták. Emberekben T. A brucei nem képes fertőzést kialakítani, de a két alfaj, a Trypanosoma brucei rhodesiense és a Trypanosoma brucei gambiense halálos betegséget okoz, amelyet alvási betegségnek neveznek.

Az APOL1 a hat fehérje családjának egyetlen extracelluláris tagja, amely úgy tűnik, hogy szerepet játszik a patogén által okozott fertőzés által okozott sejthalál szabályozásában 2.

Az APOL1 tartalmaz egy N-terminális ionos pórusképző domént, amely a membrán-címező motívumhoz kapcsolódik, és egy hosszú amfipatikus a-hélixet tartalmaz a C-terminális régióban. Tritryp paraziták endocitikus úton történő savanyítással az APOL1 vakuoláris membránokba kerül, ahol tritryp paraziták doménje kloridionok beáramlását váltja ki, ami a 3, 6 lizoszóma ozmotikus duzzadását eredményezi.

A gambiense az APOL1-aktivitást gátolja specifikus rezisztencia-fehérjék expresszálásával, amelyek semlegesítik a toxint a C-terminális hélixnel való közvetlen kölcsönhatással, vagy védik az endoszomális membránokat az APOL1 1, 6, 7, 8 beillesztése ellen.

A lizoszóma duzzanatának bizonyítékain kívül az APOL1 parazita lízisét alátámasztó mechanizmus nem volt egyértelmű. Ebben a munkában megpróbáltuk megvizsgálni az APOL1 által kialakított lizoszómamembrán pórusok jellegét, valamint azok bevonását a trippanoszóma lízisbe.

Meglepő módon felfedeztük, hogy az APOL1 is termel mitokondriális membrán pórusokat, és hogy egy adott kinesin szükséges ehhez az a legegyszerűbb tabletták férgektől. Megállapítottuk, hogy a trippanoszom halál egybeesik a parazita elvonási tabletták endonukleáz APOL1 által kiváltott felszabadulásával és az azt követő DNS fragmentációval.

A tápközeg ozmotikus szilárdságának növelése szacharóz hozzáadásával nagyrészt megakadályozta a lizoszomális duzzanatot a trippanolízis befolyásolása nélkül 1a. Ezért a lizoszomális duzzanat nem felelős a trippanolízisért. Ábra; Kiegészítő 1. Úgy gondolják, hogy az apoptotikus lizoszomális membrán permeabilizáció LMP tritryp paraziták teszi a katepszin 10 felszabadulását, így a tripanoszomokat fluoreszcens Tb CATL katepszinnel 11 inkubáltuk.

Hogyan alakul ki a szívférgesség? Nézd meg filmünket, mi történhet egy szúnyogcsípéssel!

Ezen túlmenően az FMK katepszin inhibitorral történő inkubálás nem akadályozta meg az APOL1 által közvetített trippanolízist, hanem gyorsította ezt a folyamatot 2c. Tf, transferrin; CF, karboxi-fluoreszcein; LY, Lucifer sárga 1 óra inkubáció; skála sáv, 2 μm; ugyanaz az expozíciós idő minden panelben. Ábraamely néhány rAPOL1 átvitele a mitokondriumba 3b.

tritryp paraziták

Ábra; Kiegészítő 2. Ez az átvitel az APOL1 endoliszoszomális membránokba történő beillesztéséhez volt szükség, mivel a T.

Az APOL1 jelenlétét szintén kísérte a mitokondriális membrán fenestráció, tritryp paraziták egy hasadási hibát okozott 3c. Más egysejtű eukariótákban a sejthalál a mitokondriális membrán permeabilizálódásból MMP következhet be, ami a G EndoG mitokondriális endonukleáz felszabadulását idézi elő Ábra; kiegészítő ábra 3b a nukleáris változások bizonyítékaival együtt.

Ezek közé tartoztak a kromatin kondenzáció heterokromatin tapaszokba 3c. És 4c.

tritryp paraziták

Ábraa DNS-fragmentációval 4e. K, kinetoplaszt; M, mitokondrium; N, mag; n, nucleolus; nyilak, heterokromatin foltok. A videók elérhetők a kiegészítő anyagokban. Ábranégy 12 független kísérletből. A Tb KIFC1 kimerülése az RNAi által kiegészítő ábra 4a nem befolyásolta az in vitro növekedési sebességet, a receptor-közvetített endocitózist, a folyadékfázis felvételét 5b.

Ábra vagy endolizoszomális pH-t 1.

tritryp paraziták

Ábra; Kiegészítő 4. Ábra, b; kiegészítő ábra 5a, b. Ezenfelül ezekben a sejtekben a rAPOL1-et csak a lizoszómában figyelték meg, és már nem a miért vannak gyerekek gyakran férgekben? 6c.

Ábra; kiegészítő ábra 5c. Ábra; Kiegészítő 6. A nyolc VHS hélixet a szekvenciák fölött jelezzük.

Teljes méretű kép A trippanolízis lekapcsolása a mitokondriális fenestrációtól A mitokondriális fenestrációnak a trippanolízis folyamatában való tritryp paraziták részvételének felmérése érdekében megpróbáltuk azonosítani azokat a trippanoszóma enzimeket, amelyek felelősek a mitokondriális hasadásért.

Azonban a mitokondriális membrán fenestráció önmagában, mint amilyen a Tb MFNL kimerüléséből ered, nem volt trippanolitikus. Ez a fenestráció nem okozott nukleáris heterokromatinizálást és trippanolízist, és nem befolyásolta a trippanolízist a rAPOL1 7a. Ábra, b.

Bal oldali panelek: átviteli elektronmikroszkópia piros nyilak és sárga nyílhegyek a fenestrált mitokondriumok hosszirányú és keresztmetszetei. Jobb panelek: fókuszált ionnyaláb-szkennelő elektronmikroszkópos tomográfia. FP, flagelláris zseb; K, kinetoplaszt; M, mitokondrium; N, mag; n, nucleolus; nyilak, heterokromatin foltok.

aszcariasis, hogyan lehet megfertőződni az ember parazitái

Egy adott BH3-mutáns MutK esetén a mitokondriális membrán depolarizáció a trippanolízissel szembeni rezisztenciával együtt történt, ami arra utal, hogy a membrán beillesztése megfelelő MMP nélkül történik 8a. Amint a 9. Ezek az eredmények azonban nem teszik lehetővé az APOL1 pórusok szerkezetére vonatkozó következtetéseket, amelyeket a BH3-szerű peptid befolyásolhat. A PK-val szembeni polipeptid rezisztenciát az inkubációs kivonatok nyugati blotjainak autoradiográfiájával értékeltük csillagok: a PK-tól védett APOL1 fragmensek a membránba történő behelyezést követően.

A központi paneleknél az APOL1 3. Teljes méretű kép Vita Eredményeink azt mutatják, hogy T. Eddig tritryp paraziták in vitro 14, 21 oxidatív stressz után beszámoltak a programozott trippanoszóma-halálról, de úgy tűnik, hogy az APOL1 által végzett T.

tritryp paraziták tabletta az összes parazita számára a bélben

Trypanoszómákban az APOL1 által képződött lizoszomális pórusok túl kicsi a katepszin felszabadulásához, és a katepszin nem támogatja a 8, 11, 12 trippanolízist. Hasonlóképpen a kaszpázokat nem lehet bevonni, mert a trippanosomatidok nem tartalmaznak kaszpázokat A kinetikai adatok azt sugallják, hogy az APOL1 gyorsan eljuttatható mind a mitokondriumokhoz, mind a lizoszomokhoz.

Mivel a trippanolízis nyilvánvalóan giardiasis kezelési módszerei, 6, 7-es endocitózistól függ, a mitokondriumba történő Tb KIFC1-közvetített APOL1-célzásnak az endoszomákba történő első felvételét kell követnie.

Úgy tűnt, hogy az APOL1-et nem forgalmazták a plazmamembránra, mivel a rAPOL1 — BODIPY-t soha nem észlelték ebben fehér férgek kicsi tritryp paraziták rekeszben, és a plazma membrán pórusaira vonatkozóan nem volt bizonyíték a sejthalálig, amit propidium-jodid festéssel kiegészítő ábra 8b figyeltek meg. Ez a megállapítás kizárta a citoplazmatikus endonukleázok, például a TbTatD bevonását, mint például az oxidatív stressz által kiváltott trippanolízis során.

Azonban az MMP után más mitokondriális fehérjék is felszabadulhatnak, és az apoptózis-indukáló faktor feltételezett trippanoszomális homológjának kiesése alacsony, de szignifikáns rezisztenciát eredményezett a rAPOL1-hez képest kiegészítő 2. Ahhoz, tritryp paraziták ez a transzport megtörténjen, még nem tisztázott, de az APOL1 membránokba való beillesztése szükségesnek tűnik, és az ilyen behelyezéshez szükséges savas pH követelménye megmagyarázza, hogy az APOL1 az endocitikus rendszeren keresztül az első forgalom aktív legyen 1, 3, 9, Adataink az endoszomális és a mitokondriális membránok közötti fúziós eseményeket sugallják.

milyen férgek jelennek meg, hogyan kell kezelni férgek készítményei vény nélkül

Bár az ilyen eseményeket eddig nem dokumentálták, a mitokondriumok és az endoliszoszomális vakuolok közötti intim helyi kontaktusokat és mikrofúziót jelentettek 31, 32, 33, 34, A pigmentsejtekben különösen a lizoszómához kapcsolódó melanoszómák és a mitokondriumok közötti kapcsolatok magukban foglalják az MFN2 mitokondriális fúziós fehérjét Végül, a közelmúltbeli jelentés, hogy az APOL1 membrán pórus vezetőképessége drasztikusan megnövekszik, amikor alacsony ról neutrális pH-ra váltunk, magyarázatot adhat a lizoszóma és a mitokondrium közötti pórus-aktivitásra.

Az APOL1-et az endocitózis 1 veszi fel és a lizoszómába 2 szállítja, ahol ozmotikus duzzanatot okoz 3. A sárga tritryp paraziták intenzitása tükrözi az endocitikus teniosis kórokozó progresszív savasodását. Teljes méretű kép Mód Trypanoszómák és transzgenesis A paraziták vagy a tenyészetből, vagy a fertőzött rágcsáló vér DE oszlop tisztításával izoláltak.

Stabil transzformációkat kaptunk az Amaxa-ból származó tritryp paraziták módszerrel.

A transzfektált látható paraziták a vizeletben 10 ml tenyésztő tápközegben újraszuszpendáltuk, és 16 órán át inkubáltuk a megfelelő szelekciós gyógyszerek hozzáadása előtt és hígítottuk ml-re 24 lyukú lemezeken.

A tipikus kísérlet 6—8 nap elteltével ból 10—30 pozitív kutat eredményezett. Az élő sejteket óránként számláltuk egy hemocitométerrel. In vitro növekedési vizsgálatokat végeztünk a tripanoszómák napi hígításával, 10, 5 ml- 1 -en HMItel kiegészített tápközegben. A normalizálásokat referenciahelyzetekre hajtottuk végre.

Az RNSi indukciójához 1 μg ml- 1 doxiciklint adtunk a tenyészethez. A négy független kísérletben kiválasztott TbKIFC1 DNS-fragmensek 1, 2, —3, és 1, —2, nukleotidokból két alkalommal származtak. Az amplifikációs termékeket BamHI és XhoI enzimmel emésztettük, és az azonos enzimkeverékkel emésztett 38 p2T plazmidba ligáltuk. A linearizált plazmidokat egyetlen marker sejtvonalban transzfektáltuk. Az RNSi-t 1 μg ml- 1 doxiciklin Duchefa hozzáadásával indukáltuk.

A pTSARib vektorba történő klónozást a korábban leírtak szerint végeztük.

A DNázt inaktiváltuk 0, 1 térfogat DNáz inaktiváló puffer hozzáadásával 2 percig szobahőmérsékleten. Kiegészítő DNS-t szintetizáltunk a transzkriptor fordított transzkriptázzal Roche Applied Science a gyártó utasításainak megfelelően. Az összes mosási lépést pH 8-on végeztük. Szérumrezisztenciával összefüggő fehérje SRA. Az SRA affinitásoszlopot a ref.

  1. Genom fejlődés Absztrakt Számos kiváló minőségű genom áll rendelkezésre a TrypanosomaLeishmania és Phytomonas nemzetségek két gazdaszervezet trippanosomatid fajtáihozde csak töredékes információ áll rendelkezésre a monoxen single-host trippanosomatidok esetében.
  2. A nők trichinózisának tünetei

A gyöngyöket centrifugálással eltávolítottuk, és a lemerülést friss SRA gyöngyökkel 2 órán át ismételtük. A kimerült és nem kioldott szérumokat 2 órán át 4 ° Tritryp paraziták dializáltuk HMIvel szemben, mielőtt egy éjszakán át végzett kísérletet végeztünk.

A teljes APOL1 kimerülés biztosítása érdekében az alikvotokat Western-blottal analizáltuk az affinitáskromatográfia előtt és után, és szükség esetén további elúciós köröket végeztünk. A detektálást vagy áramlási citometriával végeztük fluoreszcenciával aktivált sejtválogató FACS canto II alkalmazásával vagy immunfluoreszcenciával Zeiss Axioimager M2 alkalmazásával.

A szekunder antitesteket, peroxidázzal konjugált monoklonális egér anti-patkány IgG-ket vagy kecske anti-nyúl IgG-ket 1: ; Serotec ugyanabban a pufferben hígítottuk, és a kötött antitesteket kemilumineszcenciával Amersham detektáltuk. Élő mikroszkópia és áramlási citometria A mitokondriális membrán polaritás vizsgálatához a tripanoszomokat legalább 15 percig inkubáltuk 25 pM tetrametil-rodamin-etil-észter-perkloráttal Life Technology a kezelés előtt.

Immunfluoreszcenciás Pinworm diagnózis sejteket rögzítettük és a fentiek szerint kezeljük. Az anti- Tritryp paraziták EndoG antitestet 1: arányban hígítottuk. Az elsődleges antitesteket egy Alexa Fluor vagy konjugált kecske anti-egér vagy anti-nyúl Tritryp paraziták Life Technologies segítségével detektáltuk. A sejteket Zeiss Axioimager M2 szélesvásznú mikroszkóp segítségével analizáltuk.

A gyors iteratív algoritmust Zen Blue használó dekonvolúciót a tritryp paraziták. A sorozatos dehidratálás után a növekvő etanolkoncentrációban a mintákat agar ba Agar Scientific Ltd.

Az Ultrathin szekciókat 50—70 nm vastag összegyűjtöttük a Formvar-szénbevonatú rézrácsokban Leica EM UC6 ultramikrotómával, és uranil-acetáttal és ólom-citráttal festettük.

DdHban 5x3 percig történő mosás után a mintákat éjszakán át 4 ° C-on inkubáltuk. Az APOL1 a külső mitokondriális membránba importál Az izolált mitokondriumokba történő fehérjék behozatalának standard módszereit The import reactions were carried out for 10 min at 25 °C.

The samples were subsequently tritryp paraziták on ice and proteinase K was added at different concentrations. Following incubation for 10 min at 0 °C, the protease was inactivated by 2 tritryp paraziták phenylmethylsulfonyl fluoride.

Népszerű Bejegyzések

Measurement of endosomal pH We followed exactly the method previously tritryp paraziták 8. The accumulation of the weak base [ 14 C] methylamine was employed to investigate the intracellular pH and the pH of acidic organelles. The accumulation ratio was determined by dividing the intracellular concentration of the probe by the extracellular concentration. The cytoplasmic pH was assessed by measuring methylamine accumulation tritryp paraziták the presence of chloroquine 0. Pooled organic phase was subjected to biphasic separation tritryp paraziták adding water.

Organic phase was dried under N 2 gas flux. Total lipid was further separated to neutral lipid and phospholipid by silica gel column. Each lipid fraction was dried under N 2 gas flux. Each lipid fraction was methanolized by 0.

Fatty acid methyl ester was extracted by hexane. Fatty acid methyl esters were identified by comparison of their retention times with those of standards and quantified by the surface peak method using C fatty acid for calibration.